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T4 DNA Ligase T4噬菌體DNA連接酶
產(chǎn)品編號(hào) 規(guī) 格 價(jià) 格
T8400-100 100u 535.00
說(shuō)明:T4噬菌體DNA連接酶主要催化兩條DNA鏈上相鄰的5’磷酸基和3’-Qiang基之間形成磷酸二酯鍵。它的主要用途是連接帶匹配粘端的DNA分子,或使平端的雙鏈DNA分子互相連接或與合成接頭相連接。也可催化DNA與RNA之間以及少數(shù)RNA之間的連接,但不能催化單鏈DNA之間的連接。
單位定義:0.01Weiss單位的T4 DNA連接酶可以在16℃下反應(yīng)20分鐘,連接95%的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。
注意:一個(gè)Weiss單位的T4 DNA連接酶相當(dāng)于核酸外切酶測(cè)定中的0.2單位或60個(gè)粘性末端(New England Biolabs)
存儲(chǔ)緩沖液:10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl,
1mM DTT,0.1mM EDTA和50%glycerol。
10×反應(yīng)緩沖液:300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃),
100mM MgCl2,100mM DTT,10mM ATP
質(zhì)量控制:
1 活性:大于3Weiss單位/微升。
2 藍(lán)白克隆鑒定:12Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經(jīng)內(nèi)切酶酶切產(chǎn)生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下,反應(yīng)16小時(shí)后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109培養(yǎng),白色菌落小于總菌落數(shù)的2%;12 Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經(jīng)內(nèi)切酶酶切產(chǎn)生的鈍性末端DNA在4℃下,反應(yīng)16小時(shí)后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109培養(yǎng),白色菌落小于總菌落數(shù)的5%。
3 核酸內(nèi)切酶測(cè)定:20Weiss單位酶與1μg超螺旋質(zhì)粒DNA在37℃下反應(yīng)16小時(shí),DNA的電泳圖譜不發(fā)生變化。
4 單鏈和雙鏈DNase測(cè)定:20Weiss單位酶與50ng同位素標(biāo)記的單鏈或雙鏈DNA反應(yīng)16小時(shí),單鏈DNA的釋放量小于2%,雙鏈DNA的釋放量小于1%。
5 RNase測(cè)定:37℃時(shí),20Weiss單位酶與50ng 3H-RNA保溫5小時(shí),釋放量小于1%。
6 蛋白純度:SDS PAGE 檢測(cè)純度≥90%。
儲(chǔ)存條件:−20℃
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